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分離原理液—液分配色譜法
點(diǎn)擊次數(shù):1196 更新時(shí)間:2016-03-02

分離原理液—液分配色譜法

    (Liquid-liquid Partition Chromatography)及化學(xué)鍵合相色譜(Chemically Bonded Phase Chromatography) 流動相和固定相都是液體。流動相與固定相之間應(yīng)互不相溶(極性不同,避免固定液流失),有一個明顯的分界面。當(dāng)試樣進(jìn)入色譜柱,溶質(zhì)在兩相間進(jìn)行分配。達(dá)到平衡時(shí),服從于液相色譜計(jì)算公式:ELISA試劑盒

    液相色譜計(jì)算公式式中,cs—溶質(zhì)在固定相中濃度;cm--溶質(zhì)在流動相中的濃度; Vs—固定相的體積;Vm—流動相的體積。LLPC與GPC有相似之處,即分離的順序取決于K,K大的組分保留值大;但也有不同之處,GPC中,流動相對K影響不大,LLPC流動相對K影響較大。

a. 正相液— 液分配色譜法(Normal Phase liquid Chromatography): 流動相的極性小于固定液的極性。

b. 反相液— 液分配色譜法(Reverse Phase liquid Chromatography): 流動相的極性大于固定液的極性。ELISA試劑盒

c. 液 — 液分配色譜法的缺點(diǎn):盡管流動相與固定相的極性要求*不同,但固定液在流動相中仍有微量溶解;流動相通過色譜柱時(shí)的機(jī)械沖擊力,會造成固定液流失。上世紀(jì)70年代末發(fā)展的化學(xué)鍵合固定相(見后),可克服上述缺點(diǎn)?,F(xiàn)在應(yīng)用很廣泛(70~80%)。液—固色譜法流動相為液體,固定相為吸附劑(如硅膠、氧化鋁等)。這是根據(jù)物質(zhì)吸附作用的不同來進(jìn)行分離的。

    其作用機(jī)制是:當(dāng)試樣進(jìn)入色譜柱時(shí),溶質(zhì)分子 (X) 和溶劑分子(S)對吸附劑表面活性中心發(fā)生競爭吸附(未進(jìn)樣時(shí),所有的吸附劑活性中心吸附的是S)。ELISA試劑盒

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